Diagnóstico laboratorial: Ileitis (Lawsonia intracellularis)

Test disponibles:

Patología macroscópica

• Evalúa la presencia de lesiones en tejidos que pueden sugerir la presencia de enfermedad.
• Ubicación de las lesiones: íleon terminal (a veces puede incluir el ciego).
• Existen 3 formas muy distintas de la enfermedad:
  • Enteropatía hemorrágica proliferativa (aguda/hiperaguda).
    • Engrosamiento de la mucosa intestinal.
    • Contenido hemorrágico con coágulos.

• Adenomatosis intestinal porcina (crónica sin complicaciones):
  • Engrosamiento intestinal corrugado severo.
  • Normalmente sin sangre.

• Enteritis necrótica (crónica con complicaciones):
  • Engrosamiento intestinal corrugado severo.
  • Membrana fibrinonecrótica sobre el intestino engrosado.
  • Normalmente sin sangre.

• Pros:
  • El diagnóstico presuntivo se puede realizar después de un examen macroscópico de los intestinos.
  • Puede diferenciar las 3 formas distintas de la enfermedad.
• Contras:
  • Las lesiones no son exclusivas/diagnósticas de ileitis; otras enfermedades pueden causar lesiones similares.
  • La evaluación del engrosamiento puede ser subjetiva, especialmente cuando las contracciones intestinales hacen que las paredes intestinales parezcan temporalmente más gruesas de lo normal.

Histopatología

• Evalúa la presencia de lesiones en tejidos (engrosamiento) que pueden confirmar la presencia de enfermedad.
• Tipo de muestra: tejidos.
• Pros:
  • Las lesiones histopatológicas son casi diagnósticas:
    • Se puede confirmar la presencia de proliferación de células epiteliales inmaduras de las criptas.
    • Infiltración de células inflamatorias mínima o nula.
  • Puede detectar formas leves de la enfermedad.
• Contras:
  • Se necesita fijar con formol los tejidos intestinales de animales muertos recientemente.
  • A veces, la enfermedad puede ser segmentaria, especialmente en las primeras etapas.

Inmunohistoquímica (IHC)

• Detecta la presencia de antígeno bacteriano.
• Tipo de muestra: tejidos.
• Pros:
  • Criterio de referencia.
  • Detecta bacterias en el sitio de la lesión (buena prueba de causalidad).
  • Puede identificar cantidades bajas, moderadas o altas de bacterias presentes.
• Contras:
  • Requiere que haya una cantidad de bacterias significativamente mayor que la PCR.

Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

• Detecta la presencia de secuencias específicas de ácido nucleico bacteriano (ADN).
• Tipos de muestras: tejidos intestinales, hisopos fecales, heces.
• Pros:
  • Alta sensibilidad.
  • La cuantificación por PCR se asocia con la presencia de lesiones.
  • Coste moderado:
    • A menudo se pueden combinar muestras de heces o tejidos para reducir el coste y minimizar la pérdida de sensibilidad (especialmente en lo que respecta a la relevancia clínica).
• Contras:
  • Alta sensibilidad – confirma la presencia de bacterias pero no la enfermedad.
  • No diferencia entre bacteria de vacuna viva e infección por bacteria de campo.

Ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA)

• Detecta la presencia de anticuerpos.
• Tipo de muestra: suero.
• Pros:
  • Los animales permanecen positivos durante varias semanas.
  • Puede utilizarse en casos crónicos.
  • Mayor sensibilidad de diagnóstico que la prueba de anticuerpos fluorescentes indirectos (IFA).
• Contras:
  • Los anticuerpos específicos y el momento de la detección pueden variar ligeramente entre los distintos kits comerciales disponibles.
  • Los animales tardan entre 2 y 4 semanas, según la carga bacteriana, en volverse seropositivos.
  • No diferencia entre bacteria de vacuna viva e infección por bacteria de campo.

Anticuerpos fluorescentes indirectos (IFA)

• Detecta la presencia de anticuerpos.
• Tipo de muestra: suero.
• Pros:
  • Los animales permanecen positivos durante varias semanas.
  • ​​​​​​​Puede utilizarse en casos crónicos.
• Contras:
  • ​​​​​​​Menor sensibilidad de diagnóstico que ELISA.
  • No es factible para un gran número de muestras.
  • ​​​​​​​Los animales tardan entre 2 y 4 semanas, según la carga bacteriana, en volverse seropositivos.
  • No diferencia entre bacteria de vacuna viva e infección por bacteria de campo.
  • La fiabilidad depende mucho de la habilidad de los técnicos.

Interpretación de resultados:

Patología macroscópica

• Positivo: A menudo, el diagnóstico presuntivo es suficiente.
• Negativo: Sin lesiones intestinales macroscópicas.

Histopatología

• Positivo: Fuerte asociación entre engrosamiento y enfermedad.
• Negativo: Sin lesiones intestinales.

IHC

• Positivo: La bacteria está presente en el sitio de la lesión.
• Negativo: Negativo o infección demasiado reciente (bacteria de crecimiento lento) o demasiado antigua para detectar la bacteria.

PCR

• Positivo:
  • Ct <20 fuerte vínculo con lesiones intestinales (IHC) y enfermedad.
  • Ct>30 indica presencia del microorganismo pero no se asocia con lesiones intestinales (IHC negativo) y, por lo tanto, es probable que no tenga un impacto económico en ese momento.
• Negativo: Negativo o la bacteria no se detecta si la prueba se realiza demasiado pronto (bacteria de crecimiento lento) o mucho después de la infección.

ELISA

• Positivo: Exposición anterior (> 2-4 semanas) a vacuna o bacteria de campo.
• Negativo:
  • Negativo a vacuna o bacteria de campo.
  • Infección demasiado reciente para ser detectada (bacteria de crecimiento lento).
  • El uso de antibióticos puede inhibir el crecimiento bacteriano y disminuir la respuesta inmunitaria.

IFA

• Positivo: Exposición anterior (> 2-4 semanas) a vacuna o bacteria de campo.
• Negativo:
  • Negativo a vacuna o bacteria de campo.
  • Infección demasiado reciente para ser detectada (bacteria de crecimiento lento).
  • El uso de antibióticos puede inhibir el crecimiento bacteriano y disminuir la respuesta inmunitaria.

Escenarios:

Cerdos de engorde con diarrea (aguda o crónica):

• Recoge muestras fecales de 10 o más cerdos con diarrea no tratados con antibióticos y envíalos para PCR en pooles de 5.
• Necropsia 1-3 cerdos muertos recientemente o eutanasia cerdos con diarrea. Evalúa macroscópicamente el íleon terminal en busca de engrosamiento. Recoge una muestra de íleon y fíjala en solución de formol para histopatología y IHC.

Cerdos de engorde que no están creciendo (crónico):

• Necropsia 1-3 cerdos muertos recientemente o eutanasia cerdos con diarrea. Evalúa macroscópicamente el íleon terminal en busca de engrosamiento. Recoge una muestra de íleon y fíjala en solución de formol para histopatología y IHC.

Determinación del momento de exposición:

• Recoge muestras de 10-15 cerdos a las 8, 11, 14 y 17 semanas de edad:
  • Dos enfoques para el muestreo:
    • Transversal – recoge de diferentes grupos de edad a la vez (se obtienen resultados más rápido).
    • Longitudinal – recoge de los mismos cerdos a lo largo del tiempo (se obtienen resultados más precisos).
  • ​​​​​​​Análisis de muestras de suero mediante ELISA (preferible) o IFA.
  • ​​​​​​​Análisis de muestras fecales mediante PCR en pools de 5.